SEPARACIÓN CELULAR


FACS Vantage SE

En nuestras instalaciones disponemos de un separador celular FACS Vantage SE, equipado con un láser modelo EnterpriseII de argón refrigerado por un sistema aire-agua, con longitudes de onda de excitación de 351 y 488 nm. Es fundamentalmente empleado para la excitación de Hoechst 33342, DAPI, fluoresceina, ficoeritrina, PECy5, rodamina 123, yoduro de propidio, y naranja de acridina, entre otros compuestos. Además incorpora un segundo láser de Helio-Neón de 15 mW refrigerado por aire, con una longitud de onda de emisión a 633 nm. Este láser puede emplearse para la excitación de fluorocromos como la aloficocianina (APC). La disponibilidad de reactivos conjugados a APC hace de éstos un sistema idóneo para experimentos con tres y cuatro fluorescencias. Las instalaciones están además preparadas para soportar equipamientos láser adicionales.

El FACS Vantage SE puede separar células, o adquirir datos a razón de varios miles de células por segundo (entre 10 y 30 veces mas rápido que un analizador convencional). Puesto que el Vantage SE emplea un sistema de separación con fase aérea y produce aerosoles, las muestras potencialmente biopeligrosas deben emplearse con extremada precaución, y preferentemente fijadas. Las células no biopeligrosas, y por tanto no fijadas, pueden recuperarse para cultivo de tejidos en sistemas gnotobióticos (estériles) para estudios funcionales.

El Vantage SE está equipado, además, con un sistema CloneCyt® para la separación de células individuales en placas de microtitulación. Este instrumento es capaz de separar a razón de 5,000 eventos por segundo. Cada procedimiento de separación debe organizarse con el responsable de las instalaciones, siendo habitual hacerlo con una antelación de 2 o 3 semanas. Los investigadores que utilicen el separador celular deben proporcionar 0.5 L de solución estéril de PBS como liquido acompañante de la muestra. Además, como todas las muestras necesarias para citometría de flujo, deben ser filtradas a través de mallas de nylon de 50 µm con la finalidad de retener agregados y detritus celulares.

Normalmente, el separador puede procesar hasta 200 millones de células en un solo día. La recuperación celular final dependerá del número de células positivas en la población de interés. Las densidades celulares de las muestras para los procedimientos de sorting deben ajustarse a 10-40 millones de células por mL, y son recuperadas en medio de cultivo suplementado con dosis preventivas de antibiótico.

El diseño de este instrumento es abierto, factor que le proporciona una gran flexibilidad de configuración. Debido a la exposición al usuario de determinados componentes sensibles y extremadamente costosos de reemplazar, la utilización del Vantage SE está restringida a operadores bien entrenados. Los operadores inexpertos no podrán manipularlo por tratarse de un instrumento que requiere un profundo aprendizaje y amplia experiencia de manejo, en particular para la obtención de un correcto alineamiento y un óptimo funcionamiento.